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紫外-可見分光光度法對檢測結果的影響因素

紫外-可見分光光度法對檢測結果的影響因素


分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發光強度,對該物質進行定性和定量分析的方法。常用的技術包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法。

紫外-可見分光光度法是在190~800nm波長范圍內測定物質的吸光度,用于鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。朗伯一比爾(Lambert-Beer)定律是分光光度法定量分析依據的基本原理,其意義為:當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時,其吸光度A與吸光物質的濃度c及吸收層厚度b成正比,而與透光度T成比。

紫外-可見分光光度計5個部件組成:①光源。具有穩定的、足夠輸出功率的、能提供儀器使用波段連續光譜,如鎢燈、鹵鎢燈(波長范圍350~2500納米),氘燈或氫燈(180~460納米),或可調諧染料激光光源等。②單色器。它由入射、出射狹縫、透鏡系統和色散元件(棱鏡或光柵)組成,是用以產生高純度單色光束的裝置,其功能包括將光源產生的復合光分解為單色光和分出所需的單色光束。③試樣容器,又稱吸收池。供盛放試液進行吸光度測量之用,分為石英池和玻璃池兩種,前者適用于紫外到可見區,后者只適用于可見區。容器的光程一般為0.5~10厘米。④檢測器,又稱光電轉換器。常用的有光電管或光電倍增管,后者較前者更靈敏,特別適用于檢測較弱的輻射。近年來還使用光導攝像管或光電二極管矩陣作檢測器,具有快速掃描的特點。⑤顯示裝置。這部分裝置發展較快。較高級的光度計,常備有微處理機、熒光屏顯示和記錄儀等,可將圖譜、數據和操作條件都顯示出來。

應用范圍包括:①定量分析,廣泛用于各種物料中微量、超微量和常量的無機或有機物質的測定。②定性和結構分析,紫外吸收光譜還可用于推斷空間阻礙效應、氫鍵的強度、互變異構、幾何異構現象等。反應動力學研究,即研究反應物濃度隨時間而變化的函數關系,測定反應速度反應級數,探討反應機理。④研究溶液平衡,如測定絡合物的組成,穩定常數、酸堿離解常數等。

紫外-可見分光光度法常用的定量方法是校準曲線法,即先配制一系列濃度由小到大的標準溶液,分別測定出它們的吸光度(或透光率),以吸光度(或透光率)為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線,求出標準曲線的回歸方程。在測定待測物時,操作條件應與制作標準曲線時相同,以待測液的吸光度(或透光率)從標準曲線上查出該樣品的相應濃度。

影響紫外-可見分光光度法檢測結果的主要因素有:

檢測人員操作過程是否規范且準確(試劑稱量、溶液配制、試液移取等),選用的紫外-可見分光光度法計是否工作正常,選用的測量條件是否適合(如波長、狹縫寬度等);比色皿(池)是否潔凈,參比溶液的選擇是否正確,樣品測試吸光度范圍是否在儀器測定范圍和校準曲線吸光度范圍內。

所用試劑、耗材、用水等是否符合要求,如純度、保存條件是否滿足要求,是否含有待測物或者存在干擾等;標準溶液濃度是否準確(標準溶液配制或者稀釋過程是否準確,所選用的標準溶液保存條件是否滿足要求且在有效期內等);所用量器(天平、容量瓶、移液管等)是否存在系統誤差等。

選用檢測方法是否合理,即選用的標準方法是否符合要測定的對象,如待測物性質、待測物濃度范圍及取樣量、干擾及消除情況、存在狀態等等;顯色過程操作是否正確(試劑加入順序、加入量等),顯色時間、顯色溫度等條件是否符合檢測方法的要求,是否在顯色的穩定時間內檢測。

樣品保存條件是否滿足方法要求,樣品保存期限是否在方法規定的時間內,是否存在交叉污染等;檢測過程是否采取有效的質量控制措施(如平行測定、加標、質控樣品等)。

除此之外,數據處理也會帶來誤差。最好采用標準系列法,平行多次測定,計算每次測定結果并求出平均值,按誤差理論對數據進行處理,最后給出結果。數據的轉移、計算等過程是否有誤也直接影響結果的準確性,因此,建立完善的數據審核制度對檢測很有必要。

綜上所述,檢驗人員的操作,儀器、試劑、適用性方法的選擇、環境條件等影響,都會對紫外可見分光光度法的檢測結果有影響。應合理利用這些因素減小對檢測結果的影響,進而提高檢測結果的準確性。


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